Cum să denaturați o proteină: 7 pași (cu imagini)

Cuprins:

Cum să denaturați o proteină: 7 pași (cu imagini)
Cum să denaturați o proteină: 7 pași (cu imagini)

Video: Cum să denaturați o proteină: 7 pași (cu imagini)

Video: Cum să denaturați o proteină: 7 pași (cu imagini)
Video: Regiunea in obiectiv din 25 februarie 2021 2024, Martie
Anonim

Poate că doriți să denaturați o proteină pentru un proiect științific sau poate că ați citit despre alimentele denaturate și doriți să știți cum funcționează asta. Denaturarea este procesul prin care o proteină își pierde forma și structura datorită acțiunilor din forțe externe, inclusiv căldură, radiații, acizi și solvenți. Solvenții organici denaturează de obicei proteinele. Modul exact în care denaturați o proteină depinde de cea cu care doriți să lucrați, deoarece toate necesită agenți de denaturare diferiți la niveluri diferite. Majoritatea oricăror proteine pot fi denaturate, totuși, dacă știți ce să schimbați în mediul proteic.

Pași

Metoda 1 din 2: Denaturarea unei proteine

Denaturați o proteină Pasul 1
Denaturați o proteină Pasul 1

Pasul 1. Folosiți căldura

Căldura este una dintre cele mai ușoare și mai frecvente modalități de denaturare a unei proteine. Când proteina în cauză este prezentă în alimente, simpla gătire a alimentelor va denatura proteinele. Multe proteine pot fi denaturate prin expunerea lor la o temperatură de sau peste 100 ° C (212 ° F). Acest lucru permite proteinelor să se coaguleze și să le reducă solubilitatea.

Durata expunerii depinde de ceea ce expuneți la căldură. Un ou, de exemplu, poate găti într-o tigaie la foc mediu în cinci minute, în timp ce o friptură poate dura câteva ore pentru a găti la cuptor

Denaturați o proteină Pasul 2
Denaturați o proteină Pasul 2

Pasul 2. Aplicați alcool

Alcoolul perturbă legăturile de hidrogen care apar între grupările amide ale unei legături peptidice. Atunci când o proteină este expusă la o soluție de alcool, moleculele de alcool formează noi legături cu lanțul proteic. Folosiți o soluție de alcool 70% pentru a sparge peretele celular al bacteriilor și a denatura proteina.

Alcoolii concentrați pot fi periculoși, deoarece sunt amândoi inflamabili și toxici. Purtați întotdeauna echipament de siguranță complet, inclusiv mănuși și protecție a ochilor, și manipulați-l într-un mediu sigur, controlat de temperatură

Denaturați o proteină Pasul 3
Denaturați o proteină Pasul 3

Pasul 3. Schimbați pH-ul

Structura internă a unei proteine poate fi descompusă atunci când mediul său este foarte acid sau foarte alcalin, întrucât perturbă legăturile ionice care mențin punțile sărate ale proteinei. Adăugați o soluție acidă sau bazică la proteină. Mediul înconjurător ar trebui să aibă un pH de peste 10 sau sub 4 pentru a încuraja denaturarea. Dacă provocați schimbarea cu acid, pH-ul ar trebui să fie între 2 și 5.

Schimbarea pH-ului poate ioniza un aminoacid, în funcție de pKa din fiecare grupă funcțională din acel aminoacid. De asemenea, puteți ioniza gruparea amino sau gruparea carboxil prezentă în aminoacid

Denaturați o proteină Pasul 4
Denaturați o proteină Pasul 4

Pasul 4. Încercați sărurile de metale grele

Metalele grele pot perturba legăturile din proteină, provocând pierderea structurii sale. Sărurile metalelor grele, cum ar fi mercurul și plumbul, pot fi utilizate pentru a denatura diferite proteine. Astfel de săruri sunt disponibile de la majoritatea furnizorilor de produse chimice și trebuie utilizate întotdeauna cu precauție și echipamente de siguranță adecvate, inclusiv mănuși și protecție a ochilor.

Metalele grele pot interacționa cu grupurile funcționale ale lanțului lateral al unei proteine pentru a forma complexe. Metalele grele oxidează, de asemenea, lanțurile laterale ale aminoacizilor

Metoda 2 din 2: Renatarea proteinelor

Denaturați o proteină Pasul 5
Denaturați o proteină Pasul 5

Pasul 1. Determinați dacă o proteină se poate replia

Unele forme de denaturare sunt permanente, în timp ce altele pot fi anulate. Gătitul unui ou sau carne, de exemplu, nu poate fi anulat, dar o proteină care a fost expusă la un pH ridicat poate recăpăta forma atunci când este pusă într-un mediu mai neutru.

Dacă proteina se poate replia sau nu va depinde de ADN-ul acesteia. ADN-ul va deține informațiile necesare pentru ca proteina să revină la starea sa nativă

Denaturați o proteină Pasul 6
Denaturați o proteină Pasul 6

Pasul 2. Eliminați factorul de denaturare

Aduceți mediul din jurul proteinei la stază și îndepărtați elementul denaturant. Îndepărtați acidul sau baza, de exemplu, sau aduceți proteina înapoi la o temperatură mai rezonabilă.

Denaturați o proteină Pasul 7
Denaturați o proteină Pasul 7

Pasul 3. Folosiți un kit de renaturare

Multe companii de furnizare de laborator vând kituri de renaturare care vă permit să selectați cei mai buni parametri pentru a încuraja renaturarea. Astfel de kituri pot fi utile în special dacă vă uitați la proteine într-un laborator sau într-un cadru experimental.

sfaturi

  • O proteină denaturată își pierde structura quarternară, terțiară și secundară care este evidentă în starea sa nativă, dar structura sa primară va rămâne.
  • O proteină denaturată își pierde, de asemenea, o parte din bioactivitate, în unele cazuri, ca și în cazul enzimelor, pierzându-și capacitatea de funcționare. De exemplu, este posibil ca substraturile să nu mai poată fi legate de enzimele care au fost denaturate.
  • Proteina denaturată își poate pierde solubilitatea într-o soluție.
  • De asemenea, puteți denatura acizii nucleici folosind tehnici de laborator pentru a separa firele.

Recomandat: